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考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1μg蛋白。但是染色背景比较深，需要褪色后才能进行蛋白条带的观察。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到0.5μg蛋白。但是因其在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在，选择性的和蛋白质结合形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质条带数秒内可以显现出来，约45min后着色最深。而且染色背景低，不需要脱色即可进行蛋白条带的观察。因此，非常适合对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。

考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白结合检测法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250与蛋白质结合的特性，Bradford试剂（也就是酸化的G250溶液）为阳离子，主要为双质子化，溶液为红色，其最大吸收波长（Amax）为470nm。当与蛋白稳定结合后，G250以阳离子，非质子化的形式存在，溶液变为蓝色，最大吸收波长迁移到595nm。蓝色阳离子形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此通过直接测定595nm的吸光度来反映蛋白量。此法的优点在于G250与蛋白质结合所需的时间较短（约2min左右），且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1h内保持稳定。反应灵敏度高，是一种非常常用的微量蛋白快速定量方法。

中文别名	酸性蓝90；考马斯亮蓝G；康美赛蓝G250
英文别名	Acid blue 90 Coomassie Brilliant Blue G
CAS号	6104-58-1
分子式	C47H48N3NaO7S2
分子量	854.02
外观	蓝色至红色结晶粉末
溶解性	微溶于水，最好先溶于甲醇或者乙醇
结构式

• 快速染色步骤（考马斯亮蓝G250）
  
  • 考马斯亮蓝G250染色液的配制
    将0.2g G250溶于100mL水中（需要加热至50℃促进溶解）。冷却后，加入100mL 2 N H2S04。室温放置3h-过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，小心加入22.2mL 10 N KOH，然后加入28.7g TCA。混匀后室温放置>3h，再次过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉淀。
    
  • 染色只需将胶完全浸在此染色液中，约15min后条带就会显示出来。几个小时后染色条带的亮度和灵敏度会进一步加强。
    
  • 染色液室温约稳定存放2～3周。
• Bradford蛋白定量检测（考马斯亮蓝G250）
  参考蛋白浓度测定试剂盒(货号：SY0299)的操作步骤。